为了得到高质量的R-loop数据,嘉因生物基于公司已有的CUT&Tag体系,利用S9.6抗体,开发了针对R-loop的CUT&Tag流程,具体流程包括:磁珠结合细胞/细胞核、S9.6 抗体识别R-loop、IgG二抗孵育、PA-Tn5孵育、DNA回收与建库。R-loop CUT&Tag能够在动物细胞或者动物组织上得到R-loop文库,测序后的数据通过嘉因专业的分析流程,可在全基因组水平对R-loop定位。
嘉因生物R-loop CUT&Tag流程
老规矩,我们对实测数据进行公开。以293T细胞为操作对象,进行R-loop CUT&Tag实验,同时下载已发表的R-loop CUT&Tag数据,用相同的流程对嘉因研发数据和文献数据(来自文献Genomic profiling of native R loops with a DNA-RNA hybrid recognition sensor)进行分析,结果显示,嘉因数据和文献数据的peak数接近,分别为6959和6181个peak,并且二者具有相似的R-loop信号分布及信号强度,说明嘉因生物的R-loop数据真实可靠。
Peak数
基因附近信号分布
IGV可视化
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